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?小鼠轉(zhuǎn)錄因子T-bet(T-bet)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書主要包括以下內(nèi)容?：
貨號(hào)：BS-9406 小鼠轉(zhuǎn)錄因子T-bet(T-bet)ELISA試劑盒
一、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
?試劑盒保存與平衡?：試劑盒應(yīng)保存在2-8℃條件下，使用前需室溫平衡20分鐘?。
?實(shí)驗(yàn)器材準(zhǔn)備?：準(zhǔn)備必要的實(shí)驗(yàn)器材，如酶標(biāo)儀(450nm)、高精度加樣器及槍頭、37℃恒溫箱等?。
二、樣本收集與處理
?血清?：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管收集血液，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘分離血清和紅細(xì)胞?。
?血漿?：采用EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清?。
?細(xì)胞上清液?：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物?1。
?組織勻漿?：將組織加入適量生理鹽水搗碎，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。若樣本不及時(shí)檢測(cè)，應(yīng)按一次用量分裝并凍存于-20℃?。
三、實(shí)驗(yàn)步驟
?加樣?：
在酶標(biāo)包被板上設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣品孔和空白孔。
標(biāo)準(zhǔn)品設(shè)定5個(gè)濃度點(diǎn)，每個(gè)濃度設(shè)定平行孔，加入50微升不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品。
待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40微升，再加待測(cè)樣品10微升(最終稀釋度為5倍)。
空白孔加入50微升蒸餾水?。
?溫育?：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘?。
?配液?：將濃縮洗滌液按倍數(shù)稀釋后備用?。
?洗滌?：揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)5次，拍干?。
?加酶?：每孔(除空白孔外)加入酶標(biāo)試劑50微升?。
?再次溫育?：操作同第一次溫育步驟?。
?再次洗滌?：操作同洗滌步驟?。
?顯色?：每孔先加入顯色劑A50微升，再加入顯色劑B50微升，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘?。
?終止?：每孔加終止液50微升，終止反應(yīng)(顏色由藍(lán)轉(zhuǎn)黃)?。
?測(cè)定?：以空白孔調(diào)零，在450nm波長(zhǎng)下依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)，測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行?。
四、注意事項(xiàng)
試劑盒僅用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷?。
實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封并低溫干燥保存?。
嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作，避免交叉污染和試劑浪費(fèi)?3。
五、實(shí)驗(yàn)室自備器材試劑
96孔讀板儀器
自動(dòng)洗板機(jī)
移液器和槍頭(建議使用多通道移液器/排槍)
Eppendorf管
洗板緩沖液(如neutral PBS或TBS，試劑盒內(nèi)提供足量，如需額外緩沖液可參考配方配制)?4請(qǐng)按照說(shuō)明書嚴(yán)格操作，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
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